技術(shù)文章
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技術(shù)文章
2019-920
干細(xì)胞培養(yǎng)制造技術(shù)新進(jìn)展!干細(xì)胞是一種能夠長期存活,且具有不斷自我繁殖能力和多向化潛能,幾乎存在于所有組織中的原始細(xì)胞。近年來隨著科學(xué)家們研究的深入,干細(xì)胞在血液系統(tǒng)疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、心血管疾病、自身免疫系統(tǒng)疾病以及內(nèi)分泌疾病等各種疾病的治療上讓人們看到了希望。干細(xì)胞技術(shù)是當(dāng)今醫(yī)學(xué)研究前沿也是熱門的方向之一,近年來發(fā)展迅猛,也取得了令人興奮的成果;同時科學(xué)家們在干細(xì)胞的培養(yǎng)制造上也取得了巨大的成就,近日刊登在CellStemCell上的一項研究報告中,來自麻省總醫(yī)院的科學(xué)家...
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2019-919
1.準(zhǔn)備工作準(zhǔn)備工作的內(nèi)容包括器皿的清洗、干燥與消毒,培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌,無菌室或超凈臺的清潔與消毒,培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試等。2.取材在無菌環(huán)境下從機(jī)體取出某種組織細(xì)胞(視實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩ǎ?jīng)過一定的處理(如消化分散細(xì)胞、分離等)后接入培養(yǎng)器血中,這一過程稱為取材。如是細(xì)胞株的擴(kuò)大培養(yǎng)則無取材這一過程。機(jī)體取出的組織細(xì)胞的培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。理論上講各種動物和人體內(nèi)的所有組織都可以用于培養(yǎng),實(shí)際上幼體組織(尤其是胚胎組織)比成年個體的組織容易培養(yǎng),分化程度...
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2019-918
實(shí)驗(yàn)原理:凍存和復(fù)蘇的原則:慢凍快融。當(dāng)細(xì)胞冷到零度以下,可以產(chǎn)生以下變化:細(xì)胞器脫水,細(xì)胞中可溶性物質(zhì)濃度升高,并在細(xì)胞內(nèi)形成冰晶。如果緩慢冷凍,可使細(xì)胞逐步脫水,細(xì)胞內(nèi)不致產(chǎn)生大的冰晶;相反,結(jié)晶就大,大結(jié)晶會造成細(xì)胞膜、綱胞器的損傷和破裂。復(fù)蘇過程應(yīng)快融,目的是防止小冰晶形成大冰晶,即冰晶的重結(jié)晶。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法,這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化,避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細(xì)胞造成損傷。實(shí)驗(yàn)材料15ml離心管、培養(yǎng)皿、滴管、...
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2019-916
轉(zhuǎn)染是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技術(shù)。分為物理介導(dǎo)方法:電穿孔法、顯微注射和基因槍;化學(xué)介導(dǎo)方法:如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法、和多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù);生物介導(dǎo)方法:有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染,和現(xiàn)在比較多見的各種病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)。理想細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法,應(yīng)該具有轉(zhuǎn)染效率高、細(xì)胞毒性小等優(yōu)點(diǎn)。病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù),是目前轉(zhuǎn)染效率快的方法,同時具有細(xì)胞毒性很低的優(yōu)勢。但是病毒轉(zhuǎn)染方法的準(zhǔn)備程序復(fù)雜,常常對細(xì)胞類型有很強(qiáng)的選擇性,在一般實(shí)驗(yàn)室中很難普及。其它物理和化學(xué)...
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2019-912
如何傳代貼壁細(xì)胞?細(xì)胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后,已基本上飽和,為使細(xì)胞能繼續(xù)生長,同時也將細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)大,就必須進(jìn)行傳代(再培養(yǎng))。傳代培養(yǎng)也是一種將細(xì)胞種保存下去的方法。同時也是利用培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)的必經(jīng)過程。懸浮型細(xì)胞直接分瓶就可以,而貼壁細(xì)胞需經(jīng)消化后才能分瓶。一般使用蛋白水解酶(比如胰蛋白酶)消化貼壁細(xì)胞成單個細(xì)胞,也可加入乙二胺四乙酸(EDTA)提高消化能力,EDTA是一種二價離子的螯合劑,能抑制細(xì)胞膜上的Ca2+和Mg2+。常用的細(xì)胞消化液一般含有0.25%(w/...
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