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技術文章
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技術文章
2020-220
關于細胞不貼壁的原因：1、胰蛋白酶消化過度。2、支原體污染。3、培養(yǎng)基pH值過堿（NaHCO3分解）。4、細胞老化。5、接種細胞起始濃度太低或太高。關于細胞不貼壁的解決方法：1、縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度。2、分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。3、使用無菌醋酸溶液調整pH值或充入無菌CO2。4、啟用新的保種細胞。5、調節(jié)好接種細胞濃度。
查看更多2020-219
南美胎牛血清使用方法：在細胞培養(yǎng)過程中，經(jīng)常加入5%-20%的Gibco胎牛血清，常使用的胎牛血清濃度是10%。高濃度的血清可能改變細胞的基因表達譜，影響后續(xù)實驗的結果，我們在實驗中使用10%的胎牛血清培養(yǎng)293T細胞，效果非常好。但是有些細胞也會使用5%的Gibco胎牛血清或者20%的Gibco胎牛血清，要根據(jù)具體細胞選擇合適的胎牛血清濃度。南美胎牛血清作用：1.提供對維持細胞指數(shù)生長的激素，基礎培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物，以及主要的低分子營養(yǎng)物。2.提供結合蛋白，能識別...
查看更多2020-217
1、收到細胞后首先觀察T-25瓶是否有損壞、漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。2、瓶中運輸?shù)呐囵B(yǎng)液不能重復使用，請換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)。3、對于貼壁細胞，若大部分細胞漂浮，置于培養(yǎng)箱隔夜觀察，大部分漂浮細胞重新貼壁，表明細胞活力正常，繼續(xù)培養(yǎng)，剩余漂浮的細胞可以去掉；若大部分細胞仍然不貼壁，將漂浮的細胞離心收集，用臺盼藍染色鑒定細胞活力，并與本公司銷售人員及時聯(lián)系。4、建議客戶收到細胞后不同倍鏡各拍幾張細胞的照片，記錄細胞狀態(tài)，如細胞狀態(tài)出現(xiàn)問題請于一周內(nèi)與本公...
查看更多2020-213
人黑色素瘤貼壁細胞培養(yǎng)方法如下：1、從手術室無菌取腦髓灰質或白質后，仔細剝除腦膜、血管和纖維成分，置Hanks液中漂洗一、二次。2、置于30—50倍體積的Hanks液中，此時腦組織比較柔軟，反復吹打即制成細胞懸液。3、把懸液注入離心管室溫中直立5—10分鐘后，細胞或細胞團快自然下沉，脂肪等雜物易漂浮，可吸除上層、反復二、三次，即可排除脂肪成分和其它碎塊并獲較多細胞成分。4、在沉降物中加入適量培養(yǎng)液，通過紗網(wǎng)成紗布過濾，計數(shù)并調整細胞密度。5、接入培養(yǎng)瓶或皿中，置5%CO2溫箱...
查看更多2020-210
細胞培養(yǎng)步驟：1.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：①準備F-12K培養(yǎng)基（F-12K:GIBCO,貨號：21127-022);北美胎牛血清，10%;PS1%。②培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。③凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。2.細胞處理：①復蘇細胞：將含有l(wèi)mL細胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加l-2mL培養(yǎng)基...
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